لیست اختراعات مليحه ميرزائي
سيستم زراعت ملكولي (Molecular farming) داراي مزاياي بسياري است كه ميتوان به هزينه توليد پائين، مقياسپذيري بالا و عدم وجود عوامل بيماريزاي انساني در گياهان اشاره نمود. علاوه بر اين، مهندسي كلروپلاست نيز چندين مزيت دارد كه مي¬توان بر سطوح بالايي از بيان ژن انتقال يافته هدف به دليل تعداد نسخه زياد ژنوم و عدم خاموشي ژن، توارث مادري پلاستيدها، نبودن ژن انتقاليافته در دانه گرده و در نتيجه عدم فرار ژن و بيان چندين ژن با يك پيشبرنده (Promoter) در سيستم اُپروني مشابه با پروكاريوتها تأكيد نمود. كلروپلاستهاي تراريخت گياهان، بيوراكتورهاي ايدهآلي براي توليد پروتئينهاي تشخيصي و درماني ميباشند. امروزه، سرطان يكي از مهمترين بيماريهاي تهديد كننده زندگي بشر است. رگزايي نقش مهمي را در رشد، تهاجم و پيشرفت سرطان ايفا مينمايد و لذا مهار آن رويكردي مهم براي درمان سرطان ميباشد. بيان ژن VEGFR2 - يك ملكول مرتبط با فرآيند رگزايي تومور- در عروق تومور به شدت افزايش مييابد. بنابراين، آنتيژن VEGFR2 يك هدف منطقي براي روشهاي درماني سرطان است. براي رسيدن به اين هدف، نانوباديها كانديداهاي مناسبي ميباشند. نانوباديها (يا VHH¬ها)، قطعات تك دُمين متصلشونده به آنتيژن هستند كه از آنتيباديهاي زنجيره سنگين شتر به دست ميآيند. نانوباد¬يها به دليل داشتن خصوصياتي نظير اندازه كوچك، پايداري و حلّاليت بالا و توانايي اتصال به اپيتوپهايي غيرقابل دسترس براي آنتيباديهاي معمول، براي بسياري از كاربردهاي تشخيصي و درماني مناسب ميباشند. در اين پژوهش پس از تهيه سازه مناسب و انتقال ژن هدف به پلاستيدها، بيان نانوبادي Anti-VEGFR2 در كلروپلاستهاي كاهو مطالعه شد. از جمله دلايل انتخاب گياهو كاهو به عنوان يك بيوراكتور طبيعي براي توليد پروتئين نوتركيب ميتوان به امكان دستيابي به سطوح بالايي از بيان در كلروپلاستهاي محصولات برگي، دوره رشد كوتاه و توانايي رشد تحت شرايط كنترلشده گلخانه اين گياه اشاره نمود. به منظور انتقال ژن به ژنوم كلروپلاست، از روش بيوليستيك استفاده گرديد. سپس چندين مرحله باززايي و بازكشت گياهان تراريخت ترانسپلاستوميك بر سطح محيط كشت حاوي آنتيبيوتيك انجام پذيرفت. براي اطمينان از انتقال ژن هدف به كلروپلاست كاهو از روش PCR و براي حصول كامل از هموپلاسم بودن گياهان ترانسپلاستوميك از روش Southern blotting استفاده شد. بعلاوه از روشRT-PCR براي بررسي بيان نانوبادي نوتركيب در سطح RNA و روشهايي نظير ELISA و Western blotting براي بررسي بيان پروتئين نوتركيب متصلشده به توكسين استفاده شد. نتايج بررسيها نشان دادند كه RNA و پروتئين ايمنوتوكسين توانايي بيان در كلروپلاست كاهو را دارند. در تحقيق حاضر، براي اولين بار گياه كاهوي تراريخت بيان كننده پروتئين ايمنوتوكسين توليد شد. با توجه به نقش مهم آنتيباديها و مشتقات آن در تشخيص و درمان بيماريها و هزينههاي بالاي توليد آنها در ساير سيستمها، ميتوان با توليد اين پروتئين در سيستم گياهي زمينه توليد انبوه و ارزان آن را فراهم نمود. اميد است كه اين دستاورد بتواند روزنهاي جديد در زراعت ملكولي و در جهت بهبود زندگي بشر ايجاد نمايد. چرا در صورت بهينه شدن سيستم بيان پروتئين نوتركيب در گياه كاهو، مي توان از آن براي توليد واكسنهاي خوراكي نيز بهره جست.
موارد یافت شده: 1